植物DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯芐的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用PipetTip的尖將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經過了改良,熱處理時間只需15分鐘,使用本制品從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理等。
?、侔聪卤矸Q取適量的新鮮植物材料(如選用的是冷凍干燥植物材料,則用量減半),剪成小塊放入研缽中,加入液氮,待樣品冷凍*后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時應間斷加入液氮以防止材料融化。
*如選取植物的根、種子等樣品時,因其基因組DNA含量很低,需使用超過表格中所示的參數(shù)用量,此時請分兩管進行步驟1~6的實驗操作,在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一SpinColumn中過濾,使各管的基因組DNA結合到同一個SpinColumn上。
如從培養(yǎng)的植物細胞中提取基因組DNA,請離心收集2×103~1×107的培養(yǎng)植物細胞,加入150μl水充分懸浮細胞后移入研缽中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。
注)樣品研磨應充分,否則將會嚴重影響基因組DNA的收率。
?、趯⒀欣徱浦?5℃水浴,當樣品粉末剛開始融化時,向研缽中加入700μl的SolutionA和1.2μl的RNaseA1,用力碾磨30秒。
?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿移至CollectionTube中。如勻漿體積不足650μl,請補充SolutionA至650μl。65℃保溫15分鐘。
注)處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質的種子等時,可延長水浴時間至60分鐘。