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DNA提取試劑盒是如何從動(dòng)物組織中提取基因組DNA的

  • 發(fā)布日期:2022-03-25      瀏覽次數(shù):1275
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        DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯芐的這一特性,將植物樣品凍結(jié)融解后,再使用PipetTip的端將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經(jīng)過了改良,熱處理時(shí)間只需15分鐘,使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。
        DNA提取試劑盒如何從動(dòng)物組織中提取基因組DNA:
        使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):
       ?、偃?~100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
        注)下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。
        A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
        B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
        C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織(如骨骼)等。
       ?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,溫和研磨30秒鐘。
        注)使用上述①-注)的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),請(qǐng)?jiān)诩尤隨olutionA及RNaseA1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
       ?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿液移至CollectionTube中。如果勻漿體積不足650μl,請(qǐng)補(bǔ)充SolutionA至650μl,65℃保溫5分鐘。
        使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):
        ①取1~100mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的CollectionTube中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
       ?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
        ③加入350μl的SolutionA將研磨棒上的勻漿沖入CollectionTube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。