談一談TaqDNA聚合酶的選擇竅門

常見的DNA聚合酶如Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29等等。根據(jù)耐熱性來分可分為耐熱酶和常溫酶。耐熱聚合酶如Taq、Pfu、KOD、Primerstar等，常溫聚合酶包括Klenow、Bst、Phi29等。根據(jù)保真度來分，高保真聚合酶Pfu、KOD、Phanta等，普通聚合酶Taq等。
那么根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的TaqDNA聚合酶。比如：常規(guī)的PCR擴(kuò)增和菌液鑒定，長度小于5kb的片段，保真度要求不高，使用TaqDNA聚合酶擴(kuò)增即可。選用Mix的形式，混樣更加簡單，操作更加便捷。如果混樣泡沫多，想滅掉泡沫的話，推薦大家使用Green Taq Mix。想要獲得較高的產(chǎn)量，可以選擇Taq Plus DNA聚合酶，相對于TaqDNA聚合酶擴(kuò)增性能更強(qiáng)。
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選擇熱啟動酶降低非特異性擴(kuò)增
在使用TaqDNA聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增時，有時會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，可能的原因可以從模板、引物、體系、程序中一一排查。如模板是否被污染，引物特異性如何，Mg2+濃度偏高等等，其中一個不可忽視的原因是DNA聚合酶的種類是否合適。如果排查了其它原因仍舊有非特異性產(chǎn)物，可以選擇熱啟動酶重新實(shí)驗(yàn)，即可有效減少或消除體系中其它產(chǎn)物的積累。常用的熱啟動酶分為兩類：一類是化學(xué)法修飾的熱啟動酶，如Ace Taq ，預(yù)變性95℃5-10min即可釋放酶活；一類是抗體法修飾的熱啟動酶，如Champagne Taq ，預(yù)變性95℃30s即可釋放酶活。使用時注意預(yù)變性時間，方能獲得滿意的擴(kuò)增效果。
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選擇Lamp擴(kuò)增長片段
大于5Kb的長片段又該如何擴(kuò)增呢？如果實(shí)驗(yàn)對保真度的需求不高，那么就可以使用LAmp DNA聚合酶。其保真度是Taq酶的6倍，可擴(kuò)增超過20Kb的基因組、cDNA片段，對于低拷貝、低純度、以及不同GC含量的模板都具有很高的成功率。
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選擇高保真酶快速擴(kuò)增
如果實(shí)驗(yàn)對保真度要求較高，在選擇TaqDNA聚合酶的時候就需要使用高保真酶，如Pfu、KOD、Primerstar、Phanta等。前三者都屬于*代高保真酶，已在市場中廣泛使用。