RBC裂解液,RBC-1601/RBC-1602 , 適用于裂解紅細(xì)胞,而不損傷其它有核細(xì)胞【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】:
ZDGSY生產(chǎn)的紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer),是一種用于從人或動(dòng)物的血液或組織樣品中裂解或去除紅細(xì)胞的溶液。本裂解液經(jīng)過優(yōu)化調(diào)整,只裂解紅細(xì)胞而幾乎不損傷其它有核細(xì)胞。 本產(chǎn)品包裝前已經(jīng)過無(wú)菌處理,如紅細(xì)胞裂解液處理后的樣品要做細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞融合,請(qǐng)?jiān)诔瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)進(jìn)行整個(gè)裂解操作過程。
【保存條件】: 4°C保存,一年有效。室溫保存, 3個(gè)月有效。
【組織細(xì)胞樣品操作】:
- 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理后,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
- 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,混勻,裂解1-2分鐘(本步驟可在室溫或4°C度操作)。
- 10000rpm離心5分鐘,棄紅色上清。(4°C離心效果更佳)。
- 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2-3一次,通常微量紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)檢測(cè)。
- 加入適量PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞(400-500g離心2-3分鐘,棄上清)。
- 可重復(fù)第5步1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍,4°C離心效果更佳。
- 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,用適量溶液重懸細(xì)胞后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如組織細(xì)胞不需要培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn),則洗滌步驟(4-6)可省去。
【血液樣品】:
- 取新鮮抗凝血,加入3-5倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液,混勻,裂解1-2分鐘(本步驟可在室溫或4度操作,對(duì)于鼠的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人或牛大型動(dòng)物的外周血,裂解時(shí)間需延長(zhǎng)至6-10分鐘,并且裂解過程中要偶爾搖動(dòng)試管以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解(裂解通常不超過15分鐘)。
- 10000rpm離心5分鐘,棄上清(如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟1-3次。如所得BBC是用于核酸提取,則不需重復(fù)裂解過程,少量RBC的存在,并不影響下游實(shí)驗(yàn),且下列步驟可省去,棄上清后直接加入白血病裂解液即可按照核酸提取步驟操作)。
- 加入5倍細(xì)胞體積的PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,重懸有核細(xì)胞,10000rpm離心2-3分鐘,棄上清。
- 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
- 如所得白血病只是為提取DNA,則可在室溫下操作;若白血病為提取RNA,在4°C操作效果更佳。