透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室zui簡(jiǎn)便zui常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過(guò)程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。那Spectrumlabs即用透析袋是怎樣使用的呢?1、透析的原理
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
2、透析袋的材質(zhì)與規(guī)格
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等,但用的zui多的還是用纖維素(再生纖維素 RC、纖維素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)公司(spectrum)生產(chǎn)的各種尺寸的透析管。截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量,縮寫(xiě)為MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類(lèi),單位為道爾頓(D)。截留分子量越大也就是說(shuō)透過(guò)性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小價(jià)格越貴,因?yàn)榻亓舻姆肿釉叫∫笸肝龃矫埽瑑r(jià)格越貴。商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為8mm-77mm不等。
半透膜制成的透析袋作為工具,存在透析時(shí)間長(zhǎng)、樣品回收率不高、微量樣品的難題。目前已有專為10到100ul的微量樣品透析而設(shè)計(jì)的透析工具。把樣品加在平底的透析管(類(lèi)似小量提質(zhì)粒的離心純化柱,可以插入1.5ml的離心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于緩沖液面10min即完成透析。實(shí)驗(yàn)表明,100ul pH2.8的IgG洗脫液在1L pH9.4的緩沖液中只需不到10min即可平衡到pH9.4。如果在裝緩沖液的燒杯底加磁力棒攪拌則更能加速透析速度。這種方法有較高的回收率,能夠節(jié)約珍貴的樣品,并能節(jié)約時(shí)間,特別適合摸條件的預(yù)實(shí)驗(yàn)。
Spectrumlabs即用透析袋的標(biāo)識(shí):
27mm(MD34)透析袋(MW:3500)
27mm是指透析袋干燥時(shí)的直徑。
MD34mm是指透析袋干燥時(shí)壓平的寬度。
MW:3500是指透析袋的截留分子量。