RNA提取試劑提供了一種快速,簡(jiǎn)單,經(jīng)濟(jì)有效的方法,可從全血,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,細(xì)菌細(xì)胞和真菌細(xì)胞中分離總RNA。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。專(zhuān)門(mén)的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)使污染物通過(guò)柱被有效地洗去。純的RNA用RE緩沖液洗脫,不用酚提取或醇沉淀。
RNA提取試劑主要物質(zhì)是異硫氰酸胍,它可以破壞細(xì)胞使rna釋放出來(lái)的同時(shí),保護(hù)rna的完整性。加入氯仿后離心,樣品分成水樣層和有機(jī)層。rna存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后,rna可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)還原。
無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,trizol法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>;107)均有較好的分離效果。RNA提取試劑TrizolReagent操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)的樣品。所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。trizol抽提的總rna能夠避免dna和蛋白的污染。故而能夠作rna印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(a)+選擇、體外翻譯、rna酶保護(hù)分析和分子克隆。提取時(shí)需要注意一些問(wèn)題:提取時(shí)要做到超凈臺(tái)內(nèi)操作、操作帶一次性手套、ep管及tip頭都要用0.1%處理(0.1%depc浸泡過(guò)夜后,高壓蒸氣滅菌)、小心、細(xì)致、晃動(dòng)及每次移液要輕。這樣做的*目的就是兩個(gè),一是小心rnase的污染降解rna;二是動(dòng)作過(guò)度暴力破壞rna的完整性。
另外你提的rna做電泳的問(wèn)題,一般rna電泳應(yīng)該是做甲醛變性電泳,但是一般的瓊脂糖電泳也可以,需要上樣量稍微大些,并且跑電泳的時(shí)間越短越好。