關(guān)于聚合酶的聚合作用有想知道的嗎?
發(fā)布日期:2021-09-17 瀏覽次數(shù):1741
聚合酶又稱多聚酶。是專門生物催化合成脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一類酶的統(tǒng)稱。1957年,美國科學(xué)家阿瑟·科恩伯格(ArthurKornberg)發(fā)現(xiàn)??梢宰R別修飾的NTP,例如生物素標(biāo)記、高辛標(biāo)記、熒光素標(biāo)記的NTP,可以用于各種標(biāo)記RNA的合成。同時對于T7啟動子有高度的特異性。
是一種高度特異識別T7啟動子序列的DNA依賴的5'→3'RNA聚合酶。T7RNAPolymerase可以催化單鏈或雙鏈DNAT7啟動子下游NTP的摻入,合成與T7啟動子下游的模板DNA互補(bǔ)的RNA。用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:雜交探針,基因組DNA序列分析,核糖核酸酶保護(hù)測定(RNaseprotectionassay),反義RNA合成,作為體外翻譯的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二級結(jié)構(gòu)和RNA-蛋白質(zhì)相互作用,核酸擴(kuò)增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
在引物RNA'-OH末端,以dNTP為底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現(xiàn)為新進(jìn)入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有催化作用。dNTP進(jìn)入結(jié)合位點后,可能使酶的構(gòu)象發(fā)生變化,促進(jìn)3'-OH與5'-PO4結(jié)合生成磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進(jìn)入結(jié)合位點,則不能與模板配對,無法改變酶的構(gòu)象而被3'-5'外切酶活性位點所識別并切除之。