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Taq DNA聚合酶的分類

  • 發(fā)布日期:2017-12-13      瀏覽次數(shù):4236
    • Taq DNA聚合酶有幾種,除了普通擴(kuò)增用的Taq DNA聚合酶外,還有以下幾種特意性Taq DNA聚合酶。
      a,保真性的一個(gè)通用標(biāo)準(zhǔn)是錯(cuò)配率,錯(cuò)配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的錯(cuò)配率在 10 -5 堿基 / 循環(huán)數(shù),而高保真 Taq 酶錯(cuò)配率可降到 10 -6 數(shù)量級(jí),大大降低了出錯(cuò)的可能性;它適合對(duì) PCR 保真性要求較高的實(shí)驗(yàn),如基因篩選、測(cè)序、突變檢測(cè)等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘ 到 5’ 核酸外切酶的活性。目前市面上主要有兩類產(chǎn)品:一類是混合型的高保真酶,將帶有 Proofreading 活性的酶與普通 Taq 酶(用于提高擴(kuò)增效率)混合起來(lái);另一類是單一型的高保真酶。
      b,熱啟動(dòng)Taq酶(高特異Taq酶):在 PCR *個(gè)循環(huán)變性之前,有一個(gè)升溫的過(guò)程,引物和模板會(huì)有一些非特異性配對(duì),如果這時(shí) Taq 酶發(fā)揮活性,就很容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,由于循環(huán)初期模板量非常少,產(chǎn)生的非特異性條帶經(jīng)過(guò)后面的指數(shù)擴(kuò)增,就會(huì)嚴(yán)重干擾目的片段的擴(kuò)增,甚至導(dǎo)致特異性條帶不能擴(kuò)出;而熱啟動(dòng) Taq 酶是必需經(jīng)過(guò)高溫才能激活的酶,因此在初始循環(huán)的變性之前它沒(méi)有活性,不會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,這就大大提高了 PCR 擴(kuò)增的特異性。
      c,高耐熱Taq酶: 對(duì)于有些模板變性溫度較高,需要時(shí)間較長(zhǎng),可能要求高耐熱性 Taq 酶,如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列,兩者都是從海底火山口分離出來(lái)后克隆的,是普通 Taq 酶耐熱性的三倍以上,前者在 95°C 半衰期近 7 小時(shí), 100°C 近 2 小時(shí);而后者分別為 23 小時(shí)和 8 小時(shí)。
      d,超長(zhǎng)片段擴(kuò)增Taq酶:對(duì)于作基因組圖譜、測(cè)序及分子遺傳學(xué)研究的科研人員,可能會(huì)用到超長(zhǎng)片段的擴(kuò)增, Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶, Proofreading 酶和熱啟動(dòng)抗體,對(duì)復(fù)雜模板可擴(kuò)增 10kb 片段,簡(jiǎn)單模板可達(dá) 40kb 。